Methoden van de moleculaire genetica

Dit is het tweede artikel over de materialen en methoden van de moleculaire genetica. Hoewel de gebruikte methoden voortdurend veranderen, kan een aantal principes worden aangegeven. In dit onderdeel komen methoden voor genclonering en de toepassing hiervan bij de diagnostiek van (erfelijke) aandoeningen ter sprake.

Moleculaire clonering

Moleculaire clonering is een techniek waarmee een groot aantal identieke kopieën van één DNA-fragment verkregen kan worden. Dit gebeurt door de replicatie van de vector die het gewenste fragment heeft opgenomen, in een geschikte gastheer. Men begint met het knippen van de geïsoleerde of speciaal geconstrueerde vector en het in te bouwen DNA met behulp van hetzelfde restrictie-enzym. Wanneer hierbij enkelstrengs uiteinden ontstaan, dan kan het recombinant-DNA eenvoudig gevormd worden door onderlinge verbinding met behulp van DNA-ligase. Wanneer het gebruikte endonuclease geen enkelstrengs uiteinden oplevert, dan moet voor een efficiënte fusie van de fragmenten eerst aan beide kanten een geschikte nucleotidenvolgorde worden gesynthetiseerd…